化学词典告诉你薄层色谱的操作步骤及注意事项。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。薄层色谱法（TLC），系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。 薄层色谱操作步骤 完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。⑴制板在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。称取适量硅胶，加入0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），充分搅拌均匀，进行制板。一般来说10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。⑵点样用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。①展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。③薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。④展开应密闭，展距一般为8～15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cm。⑤展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。⑥展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。⑦Rf值一般控制在0.3～0.8，当Rf值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。⑷斑点的检出展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组分，在用显色剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来表示。化合物斑点中心至原点的距离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的Rf值。薄层色谱的注意事项(1)有些溶剂，如氯仿或乙醚，常掺入痕量乙醇作为保护剂，使用前应将其蒸馏除去，否则不能得到重复的色谱图。(2)在不同的环境中保存的不同溶剂，水含量差别很大，特别是许多溶剂是亲水的，会受到环境湿度的影响，最好将其贮存在干燥器中。(3)要防止溶剂在贮存过程中受到污染.其中有些会自动氧化，右些则因贮器密封不好，受到大气污染物的污染。污染程度与贮存条件及贮存时间有关。(4)移动相和镕质相互作用会改变色谱行为，而溶剂中的杂质有时会参与这种相互作用。(5)混合移动相中的各种溶剂也会相互作用。如果溶剂不纯或各批混合溶剂组成不同，混合物的性质就可能改变。(6)混合溶剂在展开过程中可能发生分层现象，这种现象通常在弱溶剂和少量强溶剂混合时迟到。一段开始阶段优先吸附强溶剂，于是前沿就是100%的弱溶剂了。这种吸附剂被强溶剂饱和后，会出现由混合溶剂组成的策二个前沿。

化学词典告诉你薄层色谱的种类及应用。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法，从50年代发展起来至今，仍被广泛采用。 色谱的种类(1)按两相状态分类：以流动相状态为标准划分类型。用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法Gaschromatography(GC)；用液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法LiquidchromatographyLC。(2)按样品组分在两相间的分离机理分类：利用组分在流动相和固定相之间的分离原理不同而命名的分类方法。包括，吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法、凝胶渗透色谱法、离子色谱法和超临界流体色谱法等十余种方法。(3)按色谱技术分类:为提高组分的分离效能和高选择性，采取了许多技术措施，根据这些色谱技术的性质不同而形成的色谱分类法。例如，程序升温气相色谱法、反应气相色谱法、裂解气相色谱法、顶空气相色谱法、毛细管气相色谱法、多维气相色谱法、制备色谱法等七种方法。(4)按固定相存在形态分类：根据固定相在色谱分离系统中存在的形状，可分为柱色谱法（其中又含填充柱色谱法和开管柱色谱法）、平面色谱法（其中又含纸色谱法和薄层色谱法）等九种方法。(5)按色谱动力学分类：根据流动相洗脱的动力学过程不同而进行分类的色谱法，例如，冲洗色谱法、顶替色谱法和迎头色谱法等。薄层色谱的应用1、食品和营养食品中的营养成分是蛋白质、氨基酸、糖类、油和脂肪、维生素、食用色素等。与食品和营养有害的物质则有残留农药、致癌的黄曲霉素等。这些成分都可用薄层色谱法定性和定量。蛋白质和多肽水解为氨基酸，对不同来源的动物性和植物性蛋白水解后产生不同的氨基酸进行定性和定量，有助于解决蛋白质的结构和食品营养问题。二十多种氨基酸用硅胶G薄层板双向展开，一次即能分开，然后定性和定量，方法快速而简便。多糖和寡糖可水解为单糖，可用薄层色谱法进行单糖和双糖的定性和定量。文献上有每一个糖的Rf值和相应的展开剂。油和脂肪解为脂肪酸，脂肪酸的种类和结构中的不饱和键数，与营养和卫生有关，关于油和脂肪的薄层（硅胶、硅藻土、纤维素）分析，文献和综述很多。脂溶性和水溶性维生素在薄层上可方便地定性和定量，例如脂溶性维生素A，D，E，K及B2，B6，B12，酶酸，泛酸，叶酸，C，促生素在硅胶G薄层上可用苯：甲醇：丙酮：冰醋酸（7:2:0.5:0.5）分开。用硅胶G薄层和丙酮：氯仿（1:1）以及激发波长365nm和波长450nm，可用荧光法测定ng量的曲黄素B1,B2,G1,G2，法灵敏快速。2、药物和药物代谢薄层色谱法在合成药物和天然药物中的应用很广。有些文献和内容偏重于合成药物、化合物及其代谢产物，有文献为在中草药分析中的应用。每一类药物，例如磺胺、巴比妥、苯骈噻嗪、甾体激素、抗菌素、生物碱、强心甙、黄酮、挥发油和萜等，都包括几种或十几种化学结构和性质非常相似的化合物，可以在上述文献中找出一、二种全盘的展开剂，一次即能把每一类的多种化合物很好地分开。药物代谢产物的样品一般先经预处理后用薄层分析，应用也很广，但有时因含量甚微，不用采用气相和高效液相色谱法灵敏。

化学词典告诉你薄层色谱法的特点以及点样时需要注意的事项。薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 薄层色谱法的特点1、不需要高级而精密的气相色谱仪分析仪器，分析天平除外，设置和操作简单。2、与纸色谱分析法相比，优越于可以使用腐蚀性的显色剂。3、可选择的流动相和固定相范围比纸色谱法广泛。4、展开快速，且扩散的作用小，斑点比纸色谱集中，检出灵敏度比较高。技术上多样化，不仅有多中展开方式（例如，分布展开，连续展开，双向展开，浓度梯度展开等）对复杂的混合物进行分离，分析。5、适用于分离，分析少量样品。6、与气相色谱法相比，薄层色谱法适用于分离，气相色谱仪分析受热不稳定的难以挥发的样品，这点与高效液相色谱法及早期的液相柱色谱法相同。7、薄层色谱法和纸色色谱法都是手工操作，自动化程度较低，分离效果，和重现性都较差，分离复杂混合物由一定的困难。纸色谱只用于分离，然后用比色法定量。而气相色谱仪薄层色谱法分离后可直接测量斑点面积定量，或用滴定法、比色法定量。薄层色谱法点样时注意哪些问题用打孔器把滤纸制成直径2毫米的小园片，随后把小园片戳附在小号缝衣针的针尖上，其大头部分固定在软木塞上，用微量注射器吸取酒样和配制的标准溶液，缓慢地点加在小园滤纸片上，边点加边用吹风机以100℃以上的热风把点样吹干。在活化并经过冷却的薄层板上，用缝衣针的大头把硅胶薄层抠掉一小孔，直径略小于2毫米，在小孔中用少许淀粉浆糊，把点加的酒样或标准溶液的滤纸片粘附于小孔上。