元素百科资讯频道 本文主要介绍了高效液相色谱仪检常用测器的内容,高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,高效液相色谱仪常用的检测器有紫外吸收、示差折光率、荧光和安培检测器等,对它们的要求和性能指标与气相色谱检测仪基本相同。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet-visibledetector,UVD)
紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一,几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。其特点是灵敏度较高,线性范围宽,噪声低,适用于梯度洗脱,对强吸收物质检测限可达1ng,检测后不破坏样品,可用于制备,并能与任何检测器串联使用。紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似,实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器
紫外吸收检测器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长,并安装一个光栅型单色器,其波长选择范围宽(190nm~800nm)。它有两个流通池,一个作参比,一个作测量用,光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池都通过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接受到的辐射强度相等,无信号输出。当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号大小与组分浓度有关。
局限:流动相的选择受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相,每种溶剂都有截止波长,当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时,溶剂的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector,PDAD)
也称快速扫描紫外可见分光检测器,是一种新型的光吸收式检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件,构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号,然后对二极管阵列快速扫描采集数据,得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据,从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。
单光束二极管阵列检测器,光源发出的光先通过检测池,透射光由全息光栅色散成多色光,射到阵列元件上,使所有波长的光在接收器上同时被检测。阵列式接收器上的光信号学的方法快速扫描提取出来,每幅图象仅需要10ms,远远超过色谱流出峰的速度,因此可随峰扫描。
2.荧光检测器(fluorescencedetector,FD)
荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器,可检测能产生荧光的化合物。某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物,再进行荧光检测。其最小检测浓度可达0.1ng/ml,适用于痕量分析;一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级,但其线性范围不如紫外检测器宽。近年来,采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比,因而具有很高的灵敏度,在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。
3.示差折光检测器(differentialrefractiveIndexdetector,RID)
示差折光检测器是一种浓度型通用检测器,对所有溶质都有响应,某些不能用选择性检测器检测的组分,如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等,可用示差检测器检测。示差检测器是基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变化来测定样品含量的。光从一种介质进入另一种介质时,由于两种物质的折射率不同就会产生折射。只要样品组分与流动相的折光指数不同,就可被检测,二者相差愈大,灵敏度愈高,在一定浓度范围内检测器的输出与溶质浓度成正比。
4.电化学检测器(elec)chemicaldetector,ED)
电化学检测器主要有安培、极谱、库仑、电位、电导等检测器,属选择性检测器,可检测具有电活性的化合物。目前它已在各种无机和有机阴阳离子、生物组织和体液的代谢物、食品添加剂、环境污染物、生化制品、农药及医药等的测定中获得了广泛的应用。其中,电导检测器在离子色谱中应用最多。
电化学检测器的优点是:
①灵敏度高,最小检测量~般为ng级,有目可达pg级;
②选择性好,可测定大量非电活性物质中极痕量的电活性物质;
③线性范围宽,一般为4~5个数量级;
④设备简单,成本较低;
⑤易于自动操作。
5.化学发光检测器(c。iluminescencedetector,CD)
化学发光检测器是近年来发展起来的一种快速、灵敏的新型检测器,因其设备简单、价廉、线性范围宽等优点。其原理是基于某些物质在常温下进行化学反应,生成处于激发态势反应中间体或反应产物,当它们从激发态返回基态时,就发射出光子。由于物质激发态的能量是来自化学反应,故叫作化学发光。当分离组分从色谱柱中洗脱出来后,立即与适当的化学发光试剂混合,引起化学反应,导致发光物质产生辐射,其光强度与该物质的浓度成正比。
这种检测器不需要光源,也不需要复杂的光学系统,只要有恒流泵,将化学发光试剂以一定的流速泵入混合器中,使之与柱流出物迅速而又均匀地混合产生化学发光,通过光电倍增管将光信号变成电信号,就可进行检测。这种检测器的最小检出量可达10-12g。
6.蒸发光散射检测器(Evaporative Light—Scattering De tector,ELSD)
蒸发光散射检测器(Evaporative Light—Scattering De tector,ELSD)作为一种新型通用型检测器,从20世纪80年代转化为商品起,随着技术的不断改进和完善,已经越来越多的应用于医药、化工、食品等领域。1992年,美国联邦法规将蒸发光散射检测器列入法定检测器范围,用于农业部植物脂类分析及海关总署食品分析。
ELSD的基本原理:色谱柱流出液进入雾化器形成微小液滴,与通入的气体 V(通常是氮气,有时也用空气)混合均匀,经过加热的漂移管,蒸发除去流动相,样品组分形成气溶胶,用强光或激光照射气溶胶,产生光散射,用光电二极管检测散射光。散射光的强度(I)与组分的质量(m)有下述关系:I=km 或lgI=blgm+lgk其中k和b为与蒸发室(漂移管)温度、雾化气体压力及流动相性质等实验条件有关的常数。ELSD消除了溶剂的干扰和因温度变化引起的基线漂移,即使用梯度洗脱也不会产生基线漂移。ELSD的响应不依赖样品的光学性质,只要样品的挥发性低于流动相即可被检测,尤其适用于流动相有紫外吸收干扰或梯度洗脱时基线漂移影响的情况,克服了传统检测方法的不足,已经越来越多的应用于高效液相色谱、超临界色谱和逆流色谱中。另一区别于传统检测方法的特点是:在相同的色谱条件下,物理性质相似的物质在ELSD中形成的颗粒大小、形状相近,对激光散射能力相同,而显示相同的响应。这就使利用已知的标准物质来测定结构相似、含量未知的物质成为可能。ELSD还可与梯度洗脱相容,应用范围较一些传统的检测方法要广。而且,ELSD与HPLC—MS的色谱要求一致,二者可通用。
以上就是所有高效液相色谱仪检常用测器种类及特点的全部内容介绍。