化学词典告诉你亲和色谱的一般流程及应用。亲和色谱也称为亲和层析，是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子，并且它们的结合是可逆的，在改变流动相条件时二者还能相互分离。亲和色谱可以用来从混合物中纯化或浓缩某一分子，也可以用来去除或减少混合物中某一分子的含量。 亲和色谱的一般流程亲和色谱分离的通常是混合在溶液中的物质，比如细胞内容物、培养基或血浆等。待分离的分子在通过色谱柱时被固定相或介质上的基团捕获，而溶液中其他的物质可以顺利通过色谱柱。然后把固态的基质取出后洗脱，目标分子即刻被洗脱下来。如果分离的目的是去除溶液中某种分子，那么只要分子能与介质结合即可，可以不必进行洗脱（这里有没有什么问题呢？如果不进行洗脱的话，柱子不能再生，没有实际应用价值吧，柱子多贵）。亲和色谱的应用亲和色谱的用途很广泛，可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白，还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性，这些特性使蛋白选择性地与配体结合，从而达到分离的目的。亲和色谱的另一大用途是从血浆中分离抗体。

元素百科为您介绍单分子酶促反应分子马达研究获进展。液体中的分子通常作无规则的布朗运动。对于有催化活性的酶分子而言，它们可利用酶促反应过程中底物转化时释放的能量驱动其自身的运动。以往研究表明，酶分子运动的扩散系数与底物浓度呈正相关，该现象被称为酶促分子马达。然而，酶分子是否存在类似细菌的趋向运动，即酶分子是否主动向底物浓度高的方向扩散，是一个疑问。例如，美国加利福尼亚大学伯克利分校教授Bustamante提出可以用“化学声效应（chemoacousticeffect）”来解释这种酶促分子马达。同期发表的对该文的评述中，美国宾夕法尼亚大学教授JoshuaWand则指出，“看起来有可能酶分子进化出了寻找底物的能力，但此观点尚应存疑。” 上海应物所物理生物学研究室博士研究生孙乐乐，高延静在研究员李迪、樊春海等指导下，基于DNA折纸术(DNAorigami)发展了一种对界面上酶级联反应中的单个酶分子运动轨迹实时成像的方法，并对酶分子趋向运动机制作出解释。研究人员以胆固醇修饰的DNA分子为锚定链，并利用胆固醇分子可以嵌入磷脂双层膜的特点，将酶分子固定在二维磷脂分子界面。研究发现，不同锚定手段可以控制酶分子在二维磷脂界面上的运动速度。其中，利用双链DNA动态锚定（dynamictethering）的酶分子，可以在二维界面上自由扩散；而利用DNA折纸筏（origamiraft）静态锚定（statictethering）的酶分子，则固定在磷脂膜上不动。基于此，科研人员在磷脂双分子层的二维界面上构建了一个酶级联反应：其中上游的葡萄糖氧化酶在界面上固定不动，而下游的过氧化氢酶可以在界面上自由扩散。利用全内反射显微镜，他们实时观测了单个酶分子的运动轨迹。研究发现：以葡萄糖氧化酶分子为坐标中心，下游的过氧化氢酶分子的平动速率确实随上游底物葡萄糖的增加而加快，但上下游酶分子的相对空间距离并未随酶促反应而改变。他们利用Einsteinrelation计算了界面上过氧化氢酶分子的自旋弛豫时间，发现过氧化氢酶的转动速率大大快于其平动速率，过氧化氢酶分子转动一圈的时间内，其平动距离仅为其自身直径的1/6，即使在酶促反应中，酶分子也并不存在趋向运动，趋向运动是平动与转动的竞争平衡结。这一工作解释了酶促马达并未造成趋向运动的原因。该工作构建的控制界面上不同蛋白质分子运动速度的方法及对蛋白质运动轨迹实时成像的平台，可用于研究信号通路中多种蛋白质作用及抑制剂筛选，为研究蛋白质间的动态相互作用提供了新工具。

化学词典告诉你反相色谱法的优点以及完成色谱分析的步骤。反相色谱法将探针分子注入气化室气化后，由载气带入色谱柱，测定它们在两相中的分配，从而研究高分产的各种性质，高分子与探针分子的相互作用以及高分子与高分子间的相互作用。 反相色谱法的优点1.几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。反相色谱法适于分离非极性,极性或离子型化合物，大部分的分析任务皆由反相色谱法完成；2.具有柱效高，使用寿命长，重现性好，几乎对各种类型的有机化合物都具有良好的选择性，用可用于梯度洗脱操作。3.反相色谱应用广泛，技术方面也比较成熟，可以与大多数检测器相匹配。色谱分析步骤1. 检查高纯氮、氢、氧气钢瓶及减压阀完好无损，检查色谱仪外表无异常，检查电源、插座完好。（氮气为载气，黑瓶；氢气为富氢燃烧，绿瓶；氧气助燃，蓝瓶。）2. 开启高纯氮钢瓶并调节减压阀出口压力为0.50Mpa。3. 开启高纯氢钢瓶并调节减压阀出口压力为0.20Mpa4. 开启氧气钢瓶并调节减压阀出口压力为0.40Mpa。（气瓶压力—减压阀—系统用气压力） 打开钢瓶要按顺序，先用氮气、氢气排净仪器内气体。5. 观察色谱仪上的压力表显示正常、稳定（稳流表、稳压表）6. 开启色谱仪主电源，温度已经设定好。7. 开机：MONIT（系统监控工具）——PF1（操作系统）——SYSTEM——PF1（即Start GC）。8. 按DET键，当FID（氢焰检测器）温度达到180℃，TCD（热导检测器）温度达到180℃、105℃时，开启通道#2，on，回车，再按DET，开启通道#3，on，回车，桥电流70mA，回车。 9. 打开GCC—2000工作站电源，显示器电源。进入“GCC—2000”系统，进入“基线显示”状态。 10. 手动点火，按DET键进入通道#2画面，下方有Ignite，按对应键PF1即可点火，可根据通道#2中火焰（FIame）显示on或按MOINT查看是否点火成功。 11. 脱气。将装油样的注射器放油至剩余40ml，排出注射器帽中的气泡，旋紧。用5ml注射器向油样中充入5ml氮气（注射器要用氮气清洗至少3次），打开振荡仪，将油样放入，合上盖子，打开振荡仪电源，加热至50℃后，振荡20min，冷却静置10min后取出油样，关闭振荡仪电源。 12. 用注射器（一般为5ml的）取出脱出的气体，记录脱气体积。13. 观察基线情况，当基线平稳后，转入“分析状态”。可按MONIT键调整零基线Zero Adj按对应键PF3。 14. 将标气瓶打开放气，然后关闭阀门，打开气瓶开关放一段时间，再拧紧开关，使里面留有余气，用1ml注射器取1ml标气（先用氮气及标气各洗至少3遍），在“GCC—2000”工作站中选择标气校正，打入标气，回车，开始标定。打针时禁止将油带入色谱柱。（通道A顺序：CO CH4 CO2 C2H4 C2H6 C2H2；通道B顺序：H2 53s左右 O2） 15. 标气标定完毕后，选择样品测定（在样品条件中输入温度，取样设备名称，脱气量，分析者等），用1ml注射器（已用氮气洗过）取1ml样气，打入进样口，回车，开始测定。测定完毕后，查看保留时间，若正确则接受；若峰值不对，则选择添加或删除峰，手动拖动鼠标重选波峰；查看是否含乙炔，确定是否有故障。（“浓度”接受—谱图打印—打印谱图—退出打印—退出本次测定)。16. 样品结果入库——入库——退出。 17. 关机。按DET，选择通道#3，桥电流设为0——回车——off——回车，再按DET选择通道#2，off，回车。按SYSTEM键，再按PF1（即Stop GC）。等待主机风扇停止（40℃），即待半小时后冷却，关闭色谱仪电源。 18. 关闭氧气、氢气、氮气气源（注意顺序）。 19. 总烃≤150ul/L，氢气≤150ul/L，不含乙炔，判断为正常无故障。（若有异常，还应结合改良三比值法和特征气体法来确定是什么类型的故障）